BiomarkerScript III RT Master Mix for qPCR (One-Step gDNA Remover)

目錄：RK02013

規(guī)格：100?RXN (20 μL/RXN)

運(yùn)輸方式：干冰運(yùn)輸。

保存方式：-20?℃避光保存，本產(chǎn)品避免反復(fù)凍融。

百邁客在BiomarkerScript II Reverse Transcriptase（目錄號：RK02002）基礎(chǔ)上，開發(fā)出來的一款高效、快捷的cDNA一鏈合成預(yù)混液–BiomarkerScript III RT Master Mix for qPCR (One-Step gDNA Remover)。試劑盒中含有的第三代逆轉(zhuǎn)錄酶，RNase H活性明顯降低，增強(qiáng)了與模板RNA的親和力；試劑盒中的gDNA?Remover組分，可快速去除gDNA污染，且具有熱敏性，在高溫條件下會快速失活，從而保證了cDNA的完整性。

產(chǎn)品特點(diǎn)

• 基于第三代逆轉(zhuǎn)錄酶

  RNase H活性明顯降低，增強(qiáng)了與模板RNA的親和力，逆轉(zhuǎn)錄效率高于二代產(chǎn)品。

• 高效清除基因組gDNA的污染

  試劑盒中的gDNA Remover Mix，可高效去除RNA模板中殘留的基因組 DNA污染，保證后續(xù)定量結(jié)果更加可靠。

• 靈敏度高&特異性強(qiáng)

  10 pg~1 μg總RNA均可擴(kuò)增；且保證第一鏈cDNA合成效率和成功率。

• 耐受高溫

  反應(yīng)溫度高達(dá)55 °C，適合具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)（或GC含量高）的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。

1、靈敏度檢測

均以小鼠肝臟RNA為模板，設(shè)置不同的濃度梯度：1 μg、100 ng、10 ng、1 ng、100 pg、10 pg進(jìn)行反轉(zhuǎn)，然后取相同體積的cDNA進(jìn)行qPCR實(shí)驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)：從10 pg~1 μg總RNA起始量均可反轉(zhuǎn)成cDNA。

圖1：將小鼠肝臟RNA梯度稀釋 1μg、100ng、10ng、1ng、100pg、10pg進(jìn)行反轉(zhuǎn),然后取相同體積的cDNA,進(jìn)行qPCR實(shí)驗(yàn)。結(jié)論：從10 pg~1 μg總RNA起始量均可反轉(zhuǎn)成cDNA。

2、gDNA清除效率檢測

分別加和不加gDNA Remover?處理樣本，后續(xù)進(jìn)行反轉(zhuǎn)定量。

圖2：取濃度為50 ng的DNA樣本，分別加和不加gDNA Remover處理，后續(xù)進(jìn)行反轉(zhuǎn)定量。實(shí)驗(yàn)組：加gDNA Remover處理（藍(lán)色）；對照組：未加gDNA Remover處理（橘色）。結(jié)論：加入gDNA Remover的可有效清除gDNA污染。

圖3：取不同濃度的DNA（10、100、200、500?ng），然后直接加gDNA Remover Mix，37?°C加熱5?min，進(jìn)行凝膠電泳。結(jié)論：試劑盒清除gDNA污染效果顯著，0~500 ng的DNA均可以完全清除。