Biomarker HS 2X HF Master Mix

目錄: RK02006

規(guī)格: 50 RXN

濃度: 2X

該試劑盒包含 HiFi DNA聚合酶、dNTPs、反應(yīng)緩沖Buffer、優(yōu)化的MgCl₂溶液，該預(yù)混液中僅需加入DNA模板、引物和水即可進(jìn)行擴(kuò)增。該預(yù)混液主要針對多樣性模板，對如動物、植物、cDNA等均有較好的擴(kuò)增效率。

運(yùn)輸方式：干冰運(yùn)輸。

保存方式：-20 °C避光保存。

• 高保真性和優(yōu)異的擴(kuò)增性能

Biomarker HS DNA聚合酶是一種全新的類似Pyrococcus furiosus來源的突變酶，具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)，融合了持續(xù)合成增強(qiáng)結(jié)構(gòu)域，提高了保真度和延伸速度。保真度比Pyrococcus furiosus?DNA聚合酶高6倍。

• 樣本兼容性強(qiáng)，適合動物、植物、質(zhì)粒等樣本

優(yōu)化的緩沖體系，適用于人、雞、昆蟲、質(zhì)粒、玉米、水稻、番茄、擬南芥等樣本。

圖1：使用Biomarker HS DNA聚合酶，分別以人、雞、小鼠、昆蟲、質(zhì)粒、玉米、水稻、番茄的全基因組DNA為模板，擴(kuò)增長度分別為628?bp、 2.5 kb、1750?bp、750 bp、549 bp、300 bp、1.5 kb、1.2 kb的目標(biāo)片段。所有片段均可以實(shí)現(xiàn)高特異性、高產(chǎn)量擴(kuò)增。M：250 bp DNA Marker。

• 適用于不同GC%含量片段的擴(kuò)增

圖2：使用Biomarker HS DNA聚合酶，對不同GC含量（35%~65%）片段都可實(shí)現(xiàn)高質(zhì)量的擴(kuò)增。M：250 bp DNA Marker。

• 靈敏度高，可擴(kuò)增低至10 pg的模板

圖3：使用Biomarker HS DNA聚合酶，以不同模板量（10 pg、100 pg、1 ng、10 ng、500 ng）人基因組DNA為模板，擴(kuò)增 628 bp的目的片段，發(fā)現(xiàn)不同模板量都可有效擴(kuò)增。M：250 bp DNA Marker。

• 特異性強(qiáng)，可擴(kuò)增10 kb以上的目的片段

Biomarker HS DNA聚合酶添加了能夠抑制酶活性的單克隆抗體，可進(jìn)行高特異性的熱啟動PCR。

圖4：使用Biomarker HS DNA聚合酶，以不同基因組DNA為模板，擴(kuò)增長度分別為549 bp、628?bp、1750?bp、2.5 kb、?5 kb、10 kb、13 kb的目的片段。所有片段均可以實(shí)現(xiàn)高特異性、高產(chǎn)量擴(kuò)增。M：λ-Hind Ⅲ DNA?Marker。

1.常規(guī)PCR（包含動物，植物等多種模板）

2.菌落PCR（直接菌落PCR，沒有任何抑制作用）

3.長片段擴(kuò)增（人基因組最長可達(dá)到23kb）

4.16S rDNA鑒定

5.cDNA（條帶單一，50?ng Total RNA投入量獲得的cDNA即可作為模板）

Q1：逆轉(zhuǎn)錄后的產(chǎn)物cDNA作為模板，每次加多少體積？

A1：如果DNA模板是從cDNA合成反應(yīng)中獲得的，則添加的體積應(yīng)小于總反應(yīng)體積的10%。若擴(kuò)增長片段，可適當(dāng)增加模板投入量。

Q2：擴(kuò)增完的產(chǎn)物是平末端還是黏性末端？

A2：高保真酶擴(kuò)增完的都是平末端產(chǎn)物。

Q3：出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，要如何改善？

A3：1) 引物：引物自身形成二聚體，或者引物與靶序列有非特異性互補(bǔ)。建議重新優(yōu)化設(shè)計(jì)引物；

2) 模板：模板量過高或者降解，使用量建議參考說明書。以及模板被污染，建議凝膠電泳檢測模板純度以及完整性。

3) 反應(yīng)程序不夠優(yōu)化：若雜帶比目的條帶小，可提高退火溫度，降低循環(huán)數(shù)；若雜帶比目的條帶大，可縮短延伸時(shí)間、降低循環(huán)數(shù)。

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