Biomarker 2X SYBR Green Fast qPCR Mix

目錄: RK02001

規(guī)格: 500 RXN

濃度: 2X

Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix是采用SYBR^??Green I 嵌合熒光法進(jìn)行qPCR反應(yīng)的專用試劑，通過對SYBR^??/ FAM通道進(jìn)行熒光信號定量檢測，可以獲得PCR過程中DNA擴(kuò)增的真實(shí)數(shù)據(jù)，采用抗體法熱啟動Taq酶進(jìn)行擴(kuò)增，在保證擴(kuò)增效果的同時極大地提高了產(chǎn)品的特異性。

本產(chǎn)品為2×濃度預(yù)混液，除引物和模板外，包含了所有qPCR所需成分，為實(shí)驗操作提供了極大的便利。

運(yùn)輸方式：干冰運(yùn)輸。

保存方式：-20 °C避光保存。產(chǎn)品有效期2年。

1.兼容性完美，全平臺通用：提供ROX預(yù)混版本，適用于所有主流定量PCR儀器。

2.靈敏度高：采用獨(dú)特優(yōu)化的反應(yīng)Buffer，可檢測低至10 pg的模板。

圖1：將質(zhì)粒進(jìn)行8 個10倍梯度稀釋，以5×10⁷ -10⁰?拷貝/μl的質(zhì)粒為模板，進(jìn)行擴(kuò)增。發(fā)現(xiàn)Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix擴(kuò)增效率高，且可獲得良好的線性關(guān)系。

3.擴(kuò)增性能優(yōu)越：短時間內(nèi)可反復(fù)凍融10次以上，擴(kuò)增效率依然很高。

圖2：以1 μg不同物種的RNA為模板（藍(lán)色：人肝癌細(xì)胞；青色：雞；紅色：斑馬魚；黑色：水稻種子），用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，得到cDNA產(chǎn)物。再以100 ng不同物種的 cDNA為模板，用反復(fù)凍融10次以上的Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。結(jié)果所示：溶解曲線呈現(xiàn)特征單峰。

4.特異性強(qiáng)，適應(yīng)不同樣本：通過抗體封閉聚合酶活性，有極強(qiáng)的特異性。

圖3：以1 μg不同物種的RNA為模板（紅色：人肝癌細(xì)胞；藍(lán)色：雞；黑色：斑馬魚；紫色：水稻種子；黃色：番茄果），用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand ?cDNA Synthesis Kit進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，得到cDNA產(chǎn)物。再以100 ng不同物種的 cDNA為模板，用Biomarker 2×SYBR Green Fast qPCR Mix進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。結(jié)果所示：試劑盒可完美識別目標(biāo)基因擴(kuò)增，特異性極高。

5.重復(fù)性好?：設(shè)置20個復(fù)孔，S型擴(kuò)增曲線幾乎重合。

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圖4：以1μg水稻種子的RNA為模板，用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，得到cDNA產(chǎn)物。再以100 ng的?cDNA為模板，設(shè)置20個復(fù)孔，用Biomarker?2× SYBR Green Fast qPCR Mix進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。

轉(zhuǎn)錄組項目文章發(fā)表，大部分的驗證都采用了qPCR方案，統(tǒng)計部分百邁客成功案例：人、鼠、家禽、水產(chǎn)、昆蟲、經(jīng)濟(jì)作物、林木、花卉果蔬等。

Q1：Ct值偏大（如Ct值＞30）

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1）模板量太低或基因表達(dá)豐度低，可適當(dāng)增加模板量。

2）反應(yīng)體系中存在雜質(zhì)抑制了酶的活性，可進(jìn)行梯度稀釋降低模板量，或者檢查模板的純度，確保模板純度高。

3）若是擴(kuò)增目的產(chǎn)物過長，建議優(yōu)化引物，或者采用三步法程序擴(kuò)增，同時
建議擴(kuò)增產(chǎn)物長度不超過300 bp。

4）引物設(shè)計不當(dāng)導(dǎo)致擴(kuò)增效率低，建議優(yōu)化引物，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線確認(rèn)擴(kuò)增效率。

Q2：復(fù)孔重復(fù)性差

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1）誤差導(dǎo)致，建議加樣過程中，使用精密的移液器，且可增大反應(yīng)體系。

2）儀器長時間未校準(zhǔn)，建議實(shí)驗開始前，將儀器定期校準(zhǔn)。

Q3：擴(kuò)增曲線未達(dá)到平臺期

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1）模板量太低或基因表達(dá)豐度低，可適當(dāng)增加模板量。

2）循環(huán)數(shù)太少，可適當(dāng)增加循環(huán)數(shù)。

Q4：無S型擴(kuò)增曲線

1）模板量太低、或基因表達(dá)豐度低，可適當(dāng)增加模板量。

2）樣本不純，雜質(zhì)抑制qpcr擴(kuò)增反應(yīng)?？梢灾匦绿崛颖?，或制作標(biāo)準(zhǔn)曲線確認(rèn)樣本質(zhì)量。

3）非特異性引物導(dǎo)致，建議優(yōu)化引物，液可以用內(nèi)參基因做對照確認(rèn)引物的問題。必要時換新的引物。

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