產(chǎn)品名稱

Biomarker MultiF Seamless Assembly Mix

目錄: RK02003

規(guī)格: 50 RXN

Biomarker MultiF Seamless Assembly Mix是一種簡(jiǎn)單、快速高效的DNA無(wú)縫克隆技術(shù)，可將插入片段定向克隆至任意載體的任意位點(diǎn)。將載體進(jìn)行線性化；在插入片段正/反向PCR引物5?端引入線性化載體的末端序列；PCR產(chǎn)物5?和3?最末端分別帶有和線性化載體兩末端一致的同源序列(Overlaps，15~25?bp)；這種兩端帶有載體末端序列的PCR產(chǎn)物和線性化載體按一定比例混合后，在特定酶混合物的催化下，50?℃反應(yīng)15~60?min即可進(jìn)行轉(zhuǎn)化，完成定向克隆。

運(yùn)輸方式：干冰運(yùn)輸。

保存方式：-80~-20?℃避光保存。

• 位點(diǎn)選擇靈活：載體任意位置基因克隆；
• 快速簡(jiǎn)便：省略酶切、切膠回收、酶連等過(guò)程，大約1h完成載體構(gòu)建；
• √確：不需要增加任何額外的程序；
• 克隆效率高：陽(yáng)性克隆高達(dá)90%以上；
• 一次進(jìn)行多片段目的基因的重組。

圖1：Biomarker MultiF Seamless Assembly Mix試劑盒，無(wú)縫克隆實(shí)驗(yàn)原理。

• 快速克隆
• 高通量克隆
• 無(wú)縫克隆
• DNA定點(diǎn)突變

Q1：引物如何設(shè)計(jì)？

A1: 1）載體的線性化方式有三種：雙酶切、單酶切、反向PCR，優(yōu)先選擇反向PCR。

2）引物三部分：同源臂(15~25 bp，GC含量40~60%)+酶切位點(diǎn)(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求保留或者刪除)+特異性引物(引物Tm值的計(jì)算不包括同源臂的序列)。

Q2：能夠組裝≤200 bp的dsDNA片段嗎？

A2:可以。當(dāng)片段大小≤200 bp時(shí)，為了更佳的效果，推薦插入片段使用量為載體的五倍以上。

Q3：可以使用更長(zhǎng)或更短的反應(yīng)時(shí)間嗎？

A3:可以。當(dāng)組裝2~3個(gè)片段時(shí)，15 min的反應(yīng)時(shí)間已經(jīng)足夠。當(dāng)組裝4~6個(gè)片段時(shí)，推薦60 min的反應(yīng)時(shí)間。通常情況下反應(yīng)時(shí)間不小于15 min。在某些情況下，更長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間可能適當(dāng)?shù)奶岣呓M裝效率，但是不能超過(guò)4 h。切勿使用MultiF Seamless Assembly反應(yīng)過(guò)夜。